4種氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)的信息見(jiàn)表1：

表1 目標(biāo)物信息

氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10 μg/mL）：取0.1 mL 1000 ppm 4種氯丙醇混標(biāo)溶液（貨號(hào)：CDAA-M-200252-FD-1.2ml），用正己烷溶劑定容至10 mL。于-20 ℃下保存，保存期為 6個(gè)月。

氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 μg/mL）：取1 mL 10ppm 4種氯丙醇混標(biāo)，用正己烷溶劑定容至10mL。臨用現(xiàn)配。

氘代氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 μg/mL）：取1mL 100 ppm 4種氯丙醇內(nèi)標(biāo)混標(biāo)溶液（貨號(hào)：CDAA-M-200271-FA-1.2ml），正己烷定容至10 mL。得到4種氘代氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。于-20 ℃下保存，保存期為 6個(gè)月。

按照表2進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制，臨用現(xiàn)配。

表2 氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

樣品前處理：

基質(zhì)樣品：嬰幼兒配方奶粉。

提取：

稱取試樣4 g（精確到0.01 g）于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入混合內(nèi)標(biāo)工作液（10.0 μg/mL）20 μL，加入8 mL 20%氯化鈉溶液，渦旋1 min后，超聲10 min，于4 ℃下以10 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，扎破上層薄膜后小心取出上清液于玻璃試管中，再加入8 mL 20%氯化鈉溶液重復(fù)提取操作1次，合并上清液，取8 mL待凈化。

凈化：

將待凈化液轉(zhuǎn)移至玻璃硅藻土小柱中，待樣品全部浸潤(rùn)于填料中，放置10 min。用10 mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，然后用15 mL乙酸乙酯洗脫，玻璃試管收集洗脫液。在洗脫液中加入5 g無(wú)水硫酸鈉，不斷振搖脫水，放置不少于30 min后過(guò)濾，轉(zhuǎn)移濾液至密閉性良好的帶蓋玻璃管中，于40 ℃下氮吹濃縮至0.5 mL（切忌濃縮至干），加入2.00 mL正己烷，渦旋混合，待衍生化。

衍生化：

于標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和上述凈化液中用氣密針快速加入0.05 mL七氟丁酰基咪唑，立即密封，渦旋混合30 s，放置烘箱中，于70 ℃下保溫20 min。衍生結(jié)束后，取出冷卻至室溫，加入2 mL 20%氯化鈉溶液，渦旋1 min，使水相和正己烷分層，且水相澄清。取上層正己烷相，加入約0.3 g無(wú)水硫酸鈉吸水干燥，過(guò)0.22μm 疏水PTFE濾器，將溶液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，供上機(jī)測(cè)定。

加標(biāo)樣品：

加標(biāo)水平25 μg/kg（對(duì)應(yīng)上機(jī)溶液濃度50ng）：稱取樣品后，加入氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1μg/mL） 0.1mL，后續(xù)操作同上；

加標(biāo)水平200 μg/kg（對(duì)應(yīng)上機(jī)溶液濃度400ng）：稱取樣品后，加入氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10μg/mL） 0.08mL，后續(xù)操作同上；

前處理注意事項(xiàng)：

1、前處理過(guò)程中盡量避免試樣塑料耗材，可使用玻璃巴斯德吸管、玻璃移液管、手動(dòng)進(jìn)樣針等耗材，建議進(jìn)行方法空白實(shí)驗(yàn)監(jiān)控過(guò)程本底情況；

2、硅藻土小柱使用時(shí)，待凈化液應(yīng)全部浸沒(méi)在填料上，而不能穿透，底部最好有少量的填料保持干燥，本實(shí)驗(yàn)參照標(biāo)準(zhǔn)要求取8mL提取液進(jìn)行過(guò)柱凈化，可滿足實(shí)驗(yàn)需求，但如儀器靈敏度較好，在滿足標(biāo)準(zhǔn)的前提下，建議可以取4mL提取液進(jìn)行過(guò)柱，以保證更好的凈化效果；

3、本方法為同位素內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，氘代氯丙醇能夠?qū)β缺嫉幕厥涨闆r進(jìn)行校正，氯丙醇外標(biāo)的絕對(duì)回收率可能會(huì)因?yàn)椴煌|(zhì)導(dǎo)致相對(duì)較差，如需提高絕對(duì)回收率可增加乙酸乙酯的洗脫體積至25mL；

4、七氟丁酰基咪唑易吸水，建議低溫干燥保存（可放于含有干燥劑的袋子中然后置于冰箱保存），建議臨用前從冰箱拿出；

5、衍生反應(yīng)需在密閉性良好的帶蓋玻璃管中進(jìn)行，建議使用頂空瓶進(jìn)行；

6、尼龍濾器容易檢出本底，建議使用疏水性PTFE針式濾器進(jìn)行過(guò)濾。

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

色譜柱：毛細(xì)管氣相色譜柱CD-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）

進(jìn)樣量：2 μL

進(jìn)樣口溫度：250℃，不分流進(jìn)樣

載氣：氦氣，

色譜柱流速：1.0 mL/min

升溫程序：初始溫度50 ℃保持1 min，2 ℃/min升至90 ℃，以20 ℃/min升至300 ℃保持5 min。

傳輸線溫度：280℃    離子源溫度：280℃

離子化能量：70 eV     溶劑延遲時(shí)間：5 min

掃描模式：選擇離子監(jiān)測(cè)SIM模式，離子對(duì)信息見(jiàn)表3。

表3 目標(biāo)物離子對(duì)信息

5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

以標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，目標(biāo)物與其對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4種氯丙醇化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性相關(guān)系數(shù)見(jiàn)下表。

表4  3-MCPD、2-MCPD、1,3-DCP、2,3-DCP標(biāo)準(zhǔn)曲線

5.2 加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)

嬰幼兒配方奶粉樣品的加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)見(jiàn)下表。

表5 奶粉基質(zhì)的加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)（n=3）

使用安譜實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品和相關(guān)耗材，參照國(guó)標(biāo)《GB 5009.191-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氯丙醇及其脂肪酸乙酯、縮水甘油酯的測(cè)定》第一篇，對(duì)于嬰幼兒配方奶粉樣品中1,3-二氯-２-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇、2-氯-1,3-丙二醇和3 -氯 -1,2-丙二醇進(jìn)行檢測(cè)，加標(biāo)回收率在80%-110%以上，RSD均小于5%，該方法操作簡(jiǎn)便穩(wěn)定。安譜實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品和相關(guān)耗材能夠很好的滿足奶粉基質(zhì)中氯丙醇含量的檢測(cè)。